En 1992, se describió la mutación mitocondrial A3243G que afecta al gen que codifica el ARN de transferencia de la leucina (tARNLeu[UUR]) en genealogías con diabetes y sordera neurosensorial.
Fenotípicamente, este tipo de diabetes se caracteriza por afectar a adultos jóvenes, generalmente menores de 40 años, sin obesidad asociada, que presentan antecedentes familiares de diabetes materna y sordera neurosensorial. Inicialmente, se comportan como diabéticos no insulinodependiente (DMNID) que con frecuencia progresan con el tiempo a la insulinodependencia (DMID). La variabilidad clínica estará en relación con el grado de heteroplasmia o porcentaje de ADN mitocondrial mutado existente en los diferentes tejidos.
Fundamentalmente, se afectarán aquellos tejidos con mayor dependencia del metabolismo oxidativo, como es la célula betapancreática, el sistema nervioso central (SNC) y el músculo esquelético8. La prevalencia estimada de esta entidad se sitúa entre el 0,5 y el 1,5% del total de diabetes6.
Pacientes y métodos
Los pacientes seleccionados en el estudio procedían de las consultas externas de diabetología del Hospital de Girona Doctor Josep Trueta y de la Ciudad Sanitaria y Universitaria de Bellvitge. Los criterios de inclusión eran presentar diabetes y sordera neurosensorial asociada. Diez pacientes (8 varones y 2 mujeres) cumplían los criterios y dieron su consentimiento por escrito.
Se obtuvo ADN de leucocitos de sangre periférica de cada uno de los individuos en estudio, según un procedimiento salino de separación en fases por precipitación proteica13.
Se amplificó el segmento de ADN mitocondrial en el que se encuentra el gen que codifica para el tARNLeu(UUR) mediante una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en un volumen de reacción final de 50 µl que contenía: 20 pmol de cada uno de los cebadores Hleu (5'AGGACAAGAGAAATAAGGCC3') y Lleu (5'TAGAAGAGCGATGTTGAGAG3'), 1 U de Taq-polimerasa, 250 ng de ADN, 8 mM de Tris-HCI (ph 8,3), 40 mM de KCl, 1,2 mM de MgCl2, un 0,01% de gelatina y 200 µM de cada dNTP. Se realizaron 30 ciclos de 1 min a 90 °C, 30 s a 56 °C y 30 s a 70 °C. Posteriormente, se digirieron 10 µl del producto de la PCR con la enzima de restricción Apa I durante 12 h a 37 °C. Los fragmentos resultantes fueron visualizados tras electroforesis en geles de acrilamida al 12% y tinción con bromuro de etidio. La presencia de la mutación A3243G determinaba la aparición de una diana de restricción y la aparición de dos bandas adicionales de 110 y 79 pares de bases (pb), frente a la población de mitocondrias no mutadas que presentaban un fragmento de 189 pb.
BIBLIOGRAFIA:
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